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ELISA實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備

1，仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)

2，承認(rèn)試劑盒在有效期內(nèi)

3，按說(shuō)明書(shū)承認(rèn)全部試劑*(數(shù)量、體積)

4，標(biāo)本制備要標(biāo)準(zhǔn)，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，留意低溫保存

5，準(zhǔn)備好全部實(shí)驗(yàn)額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等

6，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量承認(rèn)所需試劑的量

7，按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑 DIY夾心法ELISA常見(jiàn)技能攻略

8，選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì)；若選擇兩個(gè)單抗，有必要辨認(rèn)不同表位的抗體；好從同一家公司選擇抗體對(duì)。

9，ELISA實(shí)驗(yàn)中為了承認(rèn)佳信號(hào)和低布景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。一起，應(yīng)包括在恰當(dāng)規(guī)劃內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)慣例提供的規(guī)劃進(jìn)行操作。

10，標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

11，一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性規(guī)劃的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動(dòng)酶底物系統(tǒng)可在必定規(guī)劃內(nèi)提高靈敏度。

12，為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

13，若運(yùn)用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)制止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。

14，當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.