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ELISA試劑盒測定法則與測定抗體
更新時間:2016-10-20   點擊次數:1469次

原理
ELISA試劑盒其根本原理可概括為:將特異的抗原-抗體免疫學反應和酶學催化反應相聯絡,以酶促反應的擴展作用來顯現初級免疫學反應。因而,酶免疫技術一般均有兩部分構成,即一次或數次免疫學反應和一次酶促反應。抗原、抗體發生特異聯絡進程中,設法引入酶聯絡物,如酶符號的抗抗體,然后參與酶的底物,在酶催化下生成有色商品,反映出被測定抗原或抗體的量。
操作流程、類型及特征
操作流程:
檢查抗體多用直接型elisa。以純化抗原包被載體,經4℃過夜,以無關蛋白封閉起碼2小時以上,參與待測樣品,室溫孵育1小時,洗刷潔凈后加酶標抗體,再經室溫孵育、洗刷后,以底物顯色,顯色到必定程度停止反應,在酶標儀上讀效果或以肉眼區分。
類型:ELISA試劑盒具體方法的類型繁復,試劑的標準化疑問還未終究處理,溫育的時間、溫度、洗刷液的種類及洗刷次數等都是影響測定的要素。但參看以上根本進程,無論怎樣改變,均離不開抗原-抗體反應、酶標抗體的免疫學反應及酶催化作用。
特征:1、敏感性高,可檢出濃度在ug~mg/ml水平;2、特異性強;3、重復性好;4、敏捷、簡練、便宜。
試驗條件
固相載體:可作為固相載體的物質很多,如:纖維素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯葡聚糖、玻璃、硅橡膠、瓊脂糖凝膠等。可以各種形式出現;試管、微量反應板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯成品,其吸附性zui棒。固相包被的機制一般不外乎物理吸贊同共價交聯,
封閉:以無關蛋白占有載體上未被包被的空位,常用的封閉液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待測樣品:稀釋度要適合,濃度太大會發生非特異性吸附構成假陽性,過火稀釋會影響抗原-抗體之間的免疫學反應。選擇zui適稀釋度,在試驗體系中取光密度在1.0支配的稀釋度為宜。
酶聯絡物:運用高質量的酶聯絡物是elisa成功的關鍵。
注意事項
ELISA試劑盒酶聯免疫技術的試劑標準化疑問沒有*處理,溫育進程的時間、溫度、洗刷液的種類及洗刷次數都是影響終究測定的要素。為使試驗得到滿足的效果,在操作進程中應作到
1、每次試驗都必須設陽性和陰性對照。
2、封閉要*。
3、洗刷要測定。

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